Laboratorní diagnostika téměř všechinfekční onemocnění jsou založena na detekci protilátek v krvi pacienta, které jsou produkovány proti patogenním antigenům, pomocí sérologických reakcí. Vstoupili do lékařské praxe od konce devatenáctého - počátku dvacátého století.
Vývoj vědy pomohl určit antigennístruktura mikrobů a chemické vzorce jejich toxinů. To umožnilo vytvořit nejen terapeutická, ale také diagnostická séra. Získají se zavedením oslabených patogenů do laboratorních zvířat. Po několika dnech expozice se připravují přípravky z krve králíků nebo myší, které se používají k identifikaci mikrobů nebo jejich toxinů pomocí sérologických testů.
Vnější projev takové reakce závisípodmínky jeho nastavení a stav antigenů v krvi pacienta. Pokud jsou mikrobiální částice nerozpustné, pak jsou v séru vysráženy, lyžovány, vázány nebo imobilizovány. Pokud jsou antigeny rozpustné, projevuje se jev neutralizace nebo srážení.
Aglutinační test (RA)
Sérologická aglutinační reakce jevysoce specifické. Je to jednoduché provedení a dostatečně jasné, aby rychle určilo přítomnost antigenů v krevním séru pacienta. Používá se k formulaci Vidalovy reakce (diagnóza tyfu a paratyphoidní horečky) a Weigla (tyfus).
Je založen na specifických interakcíchmezi lidskými protilátkami (nebo agglutininy) a mikrobiálními buňkami (agglutinogeny). Po jejich interakci se vytvoří částice, které se vysráží. To je pozitivní znamení. K zahájení reakce lze použít živá nebo usmrcená mikrobiální činidla, houby, prvoky, krevní buňky a somatické buňky.
Reakce je chemicky rozdělena do dvou stupňů:
- Specifické spojení protilátek (AT) s antigeny (AG).
- Nespecifické - srážení konglomerátů AG-AT, tj. Tvorba aglutinátu.
Nepřímá aglutinační reakce (RPA)
Pro jeho nastavení se používá loupané jehnělidské erytrocyty a červené krvinky, předem ošetřené protilátkami nebo antigeny (záleží na tom, co technik chce najít). V některých případech jsou lidské červené krvinky léčeny imunoglobuliny. Sérologické reakce erytrocytů se považují za platné, pokud jsou usazeny na dně zkumavky. Pozitivní reakci lze říci, když jsou buňky uspořádány ve formě obráceného deštníku a zabírají celé dno. Negativní reakce se počítá, pokud se červené krvinky usadily ve sloupci nebo ve formě tlačítka ve středu dna.
Srážková reakce (RP)
Sérum pro reakci se získáumělá infekce zvířat, obvykle králíků. Tuto metodu lze použít k získání absolutně jakéhokoli sráživého séra. Nastavení sérologických srážkových reakcí je v mechanismu účinku podobné aglutinačním reakcím. Protilátky obsažené v séru se kombinují s antigeny v koloidním roztoku a vytvářejí velké proteinové molekuly, které se ukládají na dno zkumavky nebo na substrát (gel). Tato metoda je považována za vysoce specifickou a může detekovat i zanedbatelná množství látky.
Používá se k diagnostice moru, tularémie, antraxu, meningitidy a dalších nemocí. Kromě toho se podílí na forenzním lékařském vyšetření.
Reakce srážení gelu
Reakce neutralizace exotoxinu s antitoxinem (RN)
Antitoxická séra jsou schopna neutralizovatpůsobení exotoxinu produkovaného mikroorganismy. Tyto sérologické reakce jsou založeny na tomto. Mikrobiologie používá tuto metodu k titraci sér, toxinů a toxoidů a ke stanovení jejich terapeutické aktivity. Síla k neutralizaci toxinu je určena konvenčními jednotkami - AE.
Navíc díky této reakci lzeurčit druh nebo typ exotoxinu. Používá se při diagnostice tetanu, záškrtu, botulismu. Studii lze provést jak „na skle“, tak na gelu.
Lysická reakce (RL)
Tyto specifické protilátky se nazývají"doplněk". Nachází se téměř ve všech tělních tekutinách, má složitou proteinovou strukturu a je extrémně citlivý na nárůst teploty, třes, kyseliny a přímé sluneční světlo. Ale v sušeném stavu je schopen udržet své lytické vlastnosti po dobu až šesti měsíců.
Existují takové typy sérologických reakcí tohoto typu:
- bakteriolýza;
- hemolýza.
Bakteriolýza se provádí pomocí krevního sérapacientské a specifické imunitní sérum s živými mikroby. Pokud je v krvi dostatečné množství komplementu, pak výzkumník uvidí lýzu bakterií a reakce bude považována za pozitivní.
Druhá sérologická reakce krve jeskutečnost, že suspenze erytrocytů pacienta je ošetřena sérem obsahujícím hemolysiny, které se aktivují pouze za přítomnosti určitého komplimentu. Pokud existuje, pak laboratorní asistent sleduje rozpouštění červených krvinek. Tato reakce je v moderní medicíně široce používána k určení titru komplementu (tj. Nejmenšího množství, které vyvolává lýzu erytrocytů) v krevním séru a k provedení testu vazby komplementu. Tímto způsobem se provádí sérologická reakce na syfilis - Wassermanova reakce.
Reakce fixace komplementu (CBC)
Až do tohoto bodu jsme popsali jednoduchésérologické reakce. CSC je považována za komplexní reakci, protože v ní interagují ne dva, ale tři prvky: protilátka, antigen a komplement. Jeho podstata spočívá ve skutečnosti, že interakce mezi protilátkou a antigenem nastává pouze v přítomnosti komplementárních proteinů, které jsou adsorbovány na povrchu vytvořeného komplexu AG-AT.
Samotné antigeny po přidání komplementupodstoupit významné změny, které ukazují kvalitu provedené reakce. Může to být lýza, hemolýza, imobilizace, baktericidní nebo bakteriostatický účinek.
Samotná reakce probíhá ve dvou fázích:
- Tvorba komplexu antigen-protilátka, který není pro výzkumníka vizuálně viditelný.
- Změna antigenu pod vlivem komplementu.Tuto fázi lze nejčastěji vysledovat pouhým okem. Pokud reakce není vizuálně viditelná, použije se k identifikaci změn další indikátorový systém.
Indikační systém
Tato reakce je založena na vazbě komplementu.Vyčištěné erytrocyty a hemolytické sérum, které neobsahují komplement, se přidají do zkumavky hodinu po nastavení RSC. Pokud nenavázaný komplement zůstane ve zkumavce, připojí se ke komplexu AG-AT vytvořenému mezi buňkami jehněčí krve a hemolysinem a způsobí jejich rozpuštění. To bude znamenat, že RSK je negativní. Pokud erytrocyty zůstanou neporušené, pak je reakce pozitivní.
Hemaglutinační reakce (HA)
A druhá reakce není sérologická,protože červené krvinky reagují s hemaglutininy produkovanými viry. Protože každý patogen působí pouze na specifické erytrocyty (kuřecí, jehněčí, opičí), lze tuto reakci považovat za vysoce specifickou.
Pochopte, pozitivní nebo negativní,je to možné umístěním krevních buněk ve spodní části tuby Pokud se jejich vzor podobá obrácenému deštníku, pak je požadovaný virus přítomen v pacientově krvi. A pokud se všechny erytrocyty vytvořily jako mincový sloup, pak nejsou hledány žádné patogeny.
Hemaglutinační inhibiční reakce (RTGA)
Jedná se o vysoce specifickou reakci, která vám umožní určit typ, typ virů nebo přítomnost specifických protilátek v krevním séru pacienta.
Jeho podstata spočívá ve skutečnosti, že protilátky,přidán do zkumavky s testovaným materiálem, čímž se zabrání usazování antigenů na erytrocytech, čímž se zastaví hemaglutinace. Toto je kvalitativní známka přítomnosti specifických antigenů v krvi pro konkrétní cílový virus.
Imunofluorescenční reakce (RIF)
V praxi se tyto sérologické reakce dělí na dva typy: přímé a nepřímé.
Přímý RIF je produkován s antigenem, kterýpředem ošetřeno fluorescenčním sérem. A nepřímo je léčivo nejprve ošetřeno konvenční diagnostickou soupravou obsahující antigeny požadovaných protilátek, poté je znovu aplikováno luminiscenční sérum, které je specifické pro proteiny komplexu AG-AT, a mikrobiální buňky jsou viditelné pod mikroskopem.
