Термін "мікроскопія" має грецьке коріння. У перекладі воно означає дослідження об'єктів із застосуванням високоточних приладів. Останнім часом все більш популярними стали люмінесцентна і електронна мікроскопія.
Роздільна здатність
Під нею, як правило, розуміють мінімальневідстань, на якому можуть перебувати чітко помітні об'єкти. Від роздільної здатності устаткування буде залежати ступінь проникнення в мікроскопічний світ, можливість розглянути розмір досліджуваного елемента. При великому збільшенні межі об'єктів можуть зливатися. Відповідно, існують певні межі, далі яких наближення елементів безглуздо.
Метод люмінесцентної мікроскопії: механізм
При перетворенні енергії, яку поглинаєречовина, в видиме випромінювання відбувається світіння. Його називають люмінесценцією. Це явище пов'язане з тим, що деякі речовини під впливом світла починають випускати промені з іншого (як правило, великий) довжиною хвилі. Крім цього, деякі об'єкти, що мають при нормальному освітленні певний колір, під впливом ультрафіолету змінюють своє забарвлення.
специфіка
Об'єкт, який не можна побачити в ультрафіолетовомусвітлі, може випромінювати яскравий блиск, якщо його обробити спеціальним розчином. У ньому елементи світяться різними кольорами в темряві. Сила випромінювання різна, але, як правило, вона невелика. У зв'язку з цим люмінесцентна мікроскопія ефективна в затемненому приміщенні. При використанні цього виду дослідження об'єкт проглядається в світлі, який він сам і випромінює. Хімічний склад тканин, клітин впливатиме на якість вивчення. Люмінесцентна мікроскопія вважається певною мірою гістохімічним дослідженням.
Класифікація
люмінесцентна мікроскопія може бути первинною чи вторинною. В останньому випадку об'єкт обробляється спеціальними з'єднаннями, що дають світіння. первинна люмінесцентна мікроскопія грунтується на власній здатності досліджуваного елемента випромінювати світло.
устаткування
Люмінесцентна мікроскопія виконується ззастосуванням найрізноманітніших пристроїв. В якості основного їх елемента виступає освітлювач. Він оснащується лампою ультрафіолетового випромінювання. Крім цього, в пристроях використовується набір фільтрів. У деяких приладах їх досить багато різної конфігурації. Залежно від того, який колір застосовується для збудження люмінесценції - ультрафіолетовий або синій, між джерелом світла і досліджуваним об'єктом поміщають відповідний фільтр. Оскільки світіння мікроскопічного елемента енергетично слабкіше збуджуючого світла, воно буде вловлювати тільки за однієї умови. Надлишок променів, що відходять від джерела, повинна бути відтятий жовто-зеленим фільтром. Він розміщується на окулярі приладу. Найбільш вираженим ефект люмінесценції буде тоді, коли фільтр повністю відсіче промені, що відходять від світлового джерела.
З чого складається установка в видимому випромінюванні?У ній присутній яскравий світловий джерело і біологічний мікроскоп. Між дзеркалом приладу і лампою встановлюють синьо-фіолетовий фільтр. Це може бути ФС-1, УФС-3 і так далі. Жовтий фільтр надаватися на окуляр мікроскопа. З їх допомогою на об'єкт падає синьо-фіолетове світло. Він і збуджує люмінесценцію. Але цей світ може заважати побачити світіння. Тому на шляху до ока він відсікається жовтим фільтром. Установка освітлення проводиться за методом Келера, з одним винятком. Діафрагму конденсора необхідно повністю відкрити. При дослідженні важливо використовувати нефлуоресцірующіх іммерсійне масло. Для зниження власного світіння до нього додають окислювач (2-10 крапель / 1 г).
Люмінесцентна мікроскопія: застосування в мікробіології
Перевагами цього виду дослідження є:
- Можливість отримання кольорових зображень.
- Високий рівень контрастності самоізлучающіх елементів на чорному тлі.
- Виявлення і визначення локалізації окремих видів вірусів і мікробів.
- Можливість вивчення прозорих і непрозорих живих організмів.
- Вивчення життєвих процесів в їх динаміці.
Необхідно також сказати, що люмінесцентна мікроскопія сприяє розвитку найтонших методів гисто- і цитохімії, експрес-діагностики.