Serologische reacties: soorten, gebruik

Laboratoriumdiagnostiek van bijna alleinfectieziekten zijn gebaseerd op de detectie van antilichamen in het bloed van de patiënt, die worden geproduceerd tegen de pathogene antigenen, door methoden van serologische reacties. Ze gingen de medische praktijk in vanaf het einde van de negentiende - begin twintigste eeuw.

De ontwikkeling van de wetenschap heeft geholpen om antigeen te definiërende structuur van microben en de chemische formules van hun toxines. Dit maakte het mogelijk om niet alleen therapeutische, maar ook diagnostische sera te creëren. Ze worden verkregen door verzwakte ziekteverwekkers bij proefdieren te introduceren. Na enkele dagen blootstelling worden preparaten bereid uit het bloed van konijnen of muizen die worden gebruikt om microben of hun toxines te identificeren met behulp van serologische tests.

De externe manifestatie van een dergelijke reactie hangt af vande omstandigheden van de instelling en de toestand van antigenen in het bloed van de patiënt. Als microbiële deeltjes onoplosbaar zijn, precipiteren, lyseren, binden of immobiliseren ze in het serum. Als de antigenen oplosbaar zijn, manifesteert zich het fenomeen van neutralisatie of precipitatie.

Agglutinatietest (RA)

Serologische agglutinatiereactie iszeer specifiek. Het is eenvoudig in uitvoering en duidelijk genoeg om snel de aanwezigheid van antigenen in het bloedserum van de patiënt te bepalen. Het wordt gebruikt om de Vidal-reactie (diagnostiek van tyfus en paratyfus) en Weigl (tyfus) te formuleren.

Het is gebaseerd op specifieke interactiestussen menselijke antilichamen (of agglutinines) en microbiële cellen (agglutinogenen). Na hun interactie worden deeltjes gevormd die neerslaan. Dit is een positief teken. Voor het opvoeren van de reactie kunnen levende of gedode microbiële agentia, schimmels, protozoa, bloedcellen en somatische cellen worden gebruikt.

De reactie wordt chemisch onderverdeeld in twee fasen:

1. Specifieke verbinding van antilichamen (AT) met antigenen (AG).
2. Niet-specifiek - precipitatie van AG-AT-conglomeraten, dat wil zeggen de vorming van agglutinaat.

Indirecte agglutinatiereactie (RPA)

Deze reactie heeft meergevoeligheid dan de vorige. Het wordt gebruikt om ziekten te diagnosticeren die worden veroorzaakt door bacteriën, intracellulaire parasieten en protozoa. Het is zo specifiek dat het zelfs zeer lage concentraties antilichamen kan detecteren.

Gepeld lamsvlees wordt gebruikt voor de instelling.menselijke erytrocyten en rode bloedcellen, voorbehandeld met antilichamen of antigenen (dit hangt af van wat de technicus wil vinden). In sommige gevallen worden menselijke rode bloedcellen behandeld met immunoglobulinen. Serologische reacties van erytrocyten worden als geldig beschouwd als ze op de bodem van de buis worden afgezet. Een positieve reactie kan worden gezegd wanneer de cellen zijn gerangschikt in de vorm van een omgekeerde paraplu die de hele bodem beslaat. Een negatieve reactie wordt geteld als de rode bloedcellen zich in een kolom of in de vorm van een knop in het midden van de bodem hebben gevestigd.

Neerslagreactie (RP)

Serologische tests van dit type worden gebruiktdetectie van extreem kleine deeltjes antigenen. Dit kunnen bijvoorbeeld eiwitten (of hun delen) zijn, verbindingen van eiwitten met lipiden of koolhydraten, delen van bacteriën, hun toxines.

Serum voor de reactie wordt verkregen doorkunstmatige infectie van dieren, meestal konijnen. Deze methode kan worden gebruikt om absoluut elk precipiterend serum te verkrijgen. De setting van serologische neerslagreacties is qua werkingsmechanisme vergelijkbaar met agglutinatiereacties. De antilichamen in het serum combineren met de antigenen in de colloïdale oplossing en vormen zo grote eiwitmoleculen die op de bodem van de buis of op het substraat (gel) worden afgezet. Deze methode wordt als zeer specifiek beschouwd en kan zelfs verwaarloosbare hoeveelheden van een stof detecteren.

Het wordt gebruikt om pest, tularemie, miltvuur, meningitis en andere ziekten te diagnosticeren. Daarnaast houdt hij zich bezig met forensisch medisch onderzoek.

Gel neerslagreactie

Serologische tests kunnen niet alleen worden uitgevoerdin een vloeibaar medium, maar ook in een agargel. Dit wordt de diffuse neerslagmethode genoemd. Met zijn hulp wordt de samenstelling van complexe antigene mengsels bestudeerd. Deze methode is gebaseerd op de chemotaxis van antigenen tegen antilichamen en vice versa. In de gel bewegen ze met verschillende snelheden naar elkaar toe en vormen ze samen neerslaglijnen. Elke regel - één set AG-AT.

De reactie van neutralisatie van exotoxine met antitoxine (RN)

Antitoxische serums kunnen neutraliserende werking van een exotoxine geproduceerd door micro-organismen. Dit is de basis van deze serologische reacties. De microbiologie gebruikt deze methode om sera, toxines en toxoïden te titreren en om hun therapeutische activiteit te bepalen. De sterkte van toxine-neutralisatie wordt bepaald door conventionele eenheden - AE.

Bovendien kan men dankzij deze reactieom de soort of het type exotoxine te bepalen. Het wordt gebruikt bij de diagnose van tetanus, difterie, botulisme. Het onderzoek kan zowel "op glas" als in een gel worden uitgevoerd.

Lysisreactie (RL)

Immuunserum dat het lichaam binnenkomtde patiënt heeft, naast de belangrijkste functie van passieve immuniteit, ook lytische eigenschappen. Het is in staat om microbiële agentia, cellulaire vreemde elementen en virussen op te lossen die het lichaam van de patiënt binnendringen. Afhankelijk van de specificiteit van de antilichamen die in het serum zijn opgenomen, worden bacteriolysines, cytolysines, spirochetolysines, hemolysines en andere geïsoleerd.

Deze specifieke antilichamen worden genoemd"aanvulling". Het komt voor in bijna alle lichaamsvloeistoffen, heeft een complexe eiwitstructuur en is extreem gevoelig voor temperatuurstijging, schudden, zuren en direct zonlicht. Maar in gedroogde toestand kan het zijn lytische eigenschappen tot zes maanden behouden.

Er zijn dergelijke soorten serologische reacties van dit type:

- bacteriolyse;

- hemolyse.

Bacteriolyse wordt uitgevoerd met bloedserumpatiënt en specifiek immuunserum met levende microben. Als er voldoende complement in het bloed zit, ziet de onderzoeker de lysis van bacteriën en wordt de reactie als positief beschouwd.

De tweede serologische bloedreactie ishet feit dat een suspensie van de erytrocyten van de patiënt wordt behandeld met serum dat hemolysinen bevat, die alleen worden geactiveerd in aanwezigheid van een bepaald compliment. Als er een is, observeert de laboratoriumassistent het oplossen van rode bloedcellen. Deze reactie wordt in de moderne geneeskunde veel gebruikt om de complementtiter (dat wil zeggen, de kleinste hoeveelheid die de lysis van erytrocyten veroorzaakt) in het bloedserum te bepalen en om een ​​complementbindingstest uit te voeren. Op deze manier wordt een serologische reactie voor syfilis uitgevoerd - de Wasserman-reactie.

Complement fixatiereactie (CBC)

Deze reactie wordt gebruikt om antilichamen tegen het infectieuze agens in het bloedserum van de patiënt te detecteren, en om de ziekteverwekker te identificeren aan de hand van zijn antigene structuur.

Tot nu toe hebben we eenvoudig beschrevenserologische reacties. CSC wordt als een complexe reactie beschouwd, omdat er niet twee, maar drie elementen een interactie aangaan: antilichaam, antigeen en complement. De essentie ervan ligt in het feit dat de interactie tussen het antilichaam en antigeen alleen plaatsvindt in aanwezigheid van complement-eiwitten, die worden geadsorbeerd op het oppervlak van het gevormde AG-AT-complex.

De antigenen zelf, na toevoeging van complement,aanzienlijke veranderingen ondergaan, die de kwaliteit van de reactie aantonen. Het kan lysis, hemolyse, immobilisatie, bacteriedodende of bacteriostatische werking zijn.

De reactie zelf verloopt in twee fasen:

1. Vorming van een antigeen-antilichaamcomplex dat niet visueel zichtbaar is voor de onderzoeker.
2. Antigeen verandert onder invloed van complement.Deze fase is meestal met het blote oog te volgen. Als de reactie niet visueel zichtbaar is, wordt een extra indicatorsysteem gebruikt om veranderingen te identificeren.

Indicator systeem

Deze reactie is gebaseerd op complementbinding.Gezuiverde ram-erytrocyten en hemolytisch serum, dat geen complement bevat, worden een uur na het opzetten van het RSC aan de reageerbuis toegevoegd. Als ongebonden complement in de reageerbuis achterblijft, voegt het zich bij het AG-AT-complex dat tussen de lamsbloedcellen en hemolysine is gevormd en zorgt ervoor dat ze oplossen. Dit betekent dat de RSK negatief is. Als de erytrocyten intact blijven, is de reactie dienovereenkomstig positief.

Hemagglutinatiereactie (HA)

Er zijn twee fundamenteel verschillende hemagglutinatiereacties. Een daarvan is serologisch, het wordt gebruikt om bloedgroepen te bepalen. In dit geval interageren rode bloedcellen met antilichamen.

En de tweede reactie is niet van toepassing op serologische,omdat rode bloedcellen reageren met hemagglutinines die door virussen worden geproduceerd. Omdat elke ziekteverwekker alleen inwerkt op specifieke erytrocyten (kip, lam, aap), kan deze reactie als zeer specifiek worden beschouwd.

Begrijp, positief of negatief,het is mogelijk door de locatie van bloedcellen op de bodem van de reageerbuis. Als hun patroon lijkt op een omgekeerde paraplu, dan is het gewenste virus aanwezig in het bloed van de patiënt. En als alle erytrocyten als een muntkolom zijn gevormd, zijn de gezochte ziekteverwekkers niet aanwezig.

Hemagglutinatieremming (RTGA)

Dit is een zeer specifieke reactie waarmee u het type, type virussen of de aanwezigheid van specifieke antilichamen in het bloedserum van de patiënt kunt vaststellen.

De essentie ervan ligt in het feit dat antilichamen,toegevoegd aan de reageerbuis met het testmateriaal, waardoor de afzetting van antigenen op erytrocyten wordt voorkomen, waardoor hemagglutinatie wordt gestopt. Dit is een kwalitatief teken van de aanwezigheid van specifieke antigenen in het bloed voor een specifiek doelvirus.

Immunofluorescentiereactie (RIF)

De reactie is gebaseerd op het vermogen om te identificerenAG-AT-complexen onder fluorescentiemicroscopie na hun behandeling met fluorochrome kleurstoffen. Deze methode is eenvoudig in gebruik, vereist geen isolatie van een pure cultuur en kost weinig tijd. Het is onvervangbaar voor uitdrukkelijke diagnostiek van infectieziekten.

In de praktijk worden deze serologische reacties onderverdeeld in twee typen: direct en indirect.

Directe RIF wordt geproduceerd met een antigeen datvoorbehandeld met fluorescerend serum. En indirect wordt het medicijn eerst behandeld met een conventionele diagnostische kit die antigenen bevat tegen de gewenste antilichamen, en vervolgens wordt het luminescente serum, dat specifiek is voor de eiwitten van het AG-AT-complex, opnieuw aangebracht en worden microbiële cellen zichtbaar onder microscopie.