Serološke reakcije: vrste, uporaba

Laboratorijska dijagnostika gotovo svihzarazne bolesti temelje se na otkrivanju protutijela u pacijentovoj krvi koja se proizvode protiv patogenih antigena metodama seroloških reakcija. U medicinsku praksu ušli su s kraja devetnaestog - početka dvadesetog stoljeća.

Razvoj znanosti pomogao je u određivanju antigenastrukturu mikroba i kemijske formule njihovih toksina. To je omogućilo stvaranje ne samo terapijskih, već i dijagnostičkih seruma. Dobivaju se unošenjem oslabljenih patogena na laboratorijske životinje. Nakon višednevnog izlaganja, pripravljaju se pripravci iz krvi kunića ili miševa, koji se koriste za identifikaciju mikroba ili njihovih toksina pomoću seroloških ispitivanja.

Vanjska manifestacija takve reakcije ovisi ouvjetima njegovog postavljanja i stanju antigena u pacijentovoj krvi. Ako su mikrobne čestice netopljive, tada se talože, liziraju, vezuju ili imobiliziraju u serumu. Ako su antigeni topljivi, tada se očituje fenomen neutralizacije ili taloženja.

Aglutinacijski test (RA)

Reakcija serološke aglutinacije jevrlo specifična. Jednostavna je u izvedbi i dovoljno jasna da se brzo utvrdi prisutnost antigena u pacijentovom krvnom serumu. Koristi se za inscenaciju Vidalne reakcije (dijagnostika tifusa i paratifidne groznice) i Weigl (tifus).

Temelji se na specifičnim interakcijamaizmeđu humanih antitijela (ili aglutinina) i mikrobnih stanica (aglutinogeni). Nakon njihove interakcije, nastaju čestice koje se talože. To je pozitivan znak. Za zaustavljanje reakcije mogu se koristiti živi ili ubijeni mikrobni agensi, gljivice, protozoje, krvne stanice i somatske stanice.

Reakcija je kemijski raščlanjena u dva stupnja:

1. Specifična veza antitijela (AT) s antigenima (AG).
2. Nespecifično - taloženje AG-AT konglomerata, to jest stvaranje aglutinata.

Neizravna reakcija aglutinacije (RPGA)

Te reakcije ima višeosjetljivost od prethodne. Koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama, unutarćelijskim parazitima i protozoima. Toliko je specifična da može otkriti čak i vrlo nisku koncentraciju antitijela.

Za njegovo postavljanje koristi se oguljena janjetinahumani eritrociti i crvene krvne stanice, prethodno obrađeni antitijelima ili antigenima (to ovisi o tome što tehničar želi pronaći). U nekim slučajevima se crvene krvne stanice čovjeka liječe imunoglobulinama. Serološke reakcije eritrocita smatraju se valjanim ako su taložene na dno epruvete. Pozitivna reakcija može se reći kada su stanice raspoređene u obliku obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno. Negativna reakcija se računa ako su se crvena krvna zrnca smjestila u stupcu ili u obliku gumba na sredini dna.

Reakcija oborina (RP)

Služe serološkim testovima ove vrsteotkrivanje izuzetno malih čestica antigena. To mogu biti, na primjer, proteini (ili njihovi dijelovi), spojevi proteina s lipidima ili ugljikohidratima, dijelovi bakterija, njihovi toksini.

Serum za reakciju je dobiven odumjetna infekcija životinja, obično kunića. Ova metoda se može koristiti za dobivanje apsolutno bilo kojeg seruma za taloženje. Postavka seroloških reakcija oborina slična je u svom mehanizmu djelovanja kao u reakcijama aglutinacije. Antitijela sadržana u serumu kombiniraju se s antigenima u koloidnoj otopini, tvoreći velike molekule proteina, koji se talože na dno epruvete ili na supstrat (gel). Ova se metoda smatra visoko specifičnom i može otkriti čak i zanemarive količine tvari.

Koristi se za dijagnozu kuge, tularemije, antraksa, meningitisa i drugih bolesti. Osim toga, uključen je u sudsko-medicinski pregled.

Reakcija taloženja gela

Serološka ispitivanja mogu se provesti ne samou tekućem mediju, ali i u agar gelu. To se naziva metoda difuzne oborine. Uz njegovu pomoć proučava se sastav složenih antigenih smjesa. Ova metoda temelji se na hemotaksiji antigena na antitijela i obrnuto. U gelu se kreću jedna prema drugoj različitom brzinom i, sastajući se, formiraju oborinske linije. Svaka linija - jedan set AG-AT.

Reakcija neutralizacije egzotoksina s antitoksinom (RN)

Antitoksični serumi sposobni su neutraliziratidjelovanje egzotoksina koji proizvode mikroorganizmi. Te se serološke reakcije temelje na tome. Mikrobiologija koristi ovu metodu za titriranje seruma, toksina i toksoida, kao i za određivanje njihove terapijske aktivnosti. Snagu neutraliziranja toksina određuju konvencionalne jedinice - AE.

Uz to, zahvaljujući ovoj reakciji, može seodrediti vrstu ili vrstu egzotoksina. Koristi se u dijagnozi tetanusa, difterije, botulizma. Studija se može provoditi i na staklu i u gelu.

Reakcija lize (RL)

Imunski serum koji ulazi u tijelopacijent, osim svoje glavne funkcije pasivnog imuniteta, ima i litička svojstva. Sposoban je otopiti mikrobna sredstva, stanične strane elemente i viruse koji ulaze u pacijentovo tijelo. Ovisno o specifičnosti antitijela koja su uključena u serum, izoliraju se bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini i drugi.

Ta specifična antitijela se nazivaju"upotpuniti, dopuna". Nalazi se u gotovo svim tjelesnim tekućinama, složene je proteinske strukture i izuzetno je osjetljiv na porast temperature, tresenje, kiseline i izravnu sunčevu svjetlost. Ali u sušenom stanju sposobno je zadržati svoja litička svojstva do šest mjeseci.

Postoje takve vrste seroloških reakcija ove vrste:

- bakterioliza;

- hemoliza.

Bakterioliza se provodi pomoću krvnog serumapacijent i specifični imunološki serum sa živim mikrobima. Ako u krvi postoji dovoljna količina komplementa, istraživač će vidjeti lizu bakterija i reakcija će se smatrati pozitivnom.

Druga serološka reakcija krvi ječinjenica da se suspenzija eritrocita pacijenta liječi serumom koji sadrži hemolizine, koji se aktiviraju samo uz prisutnost određenog komplimenta. Ako postoji, tada laboratorijski asistent promatra otapanje crvenih krvnih stanica. Ova se reakcija naširoko koristi u suvremenoj medicini za određivanje titra komplementa (odnosno najmanje količine koja izaziva lizu eritrocita) u krvnom serumu i za ispitivanje vezanja komplementa. Na taj se način provodi serološka reakcija na sifilis - Wassermanova reakcija.

Reakcija fiksacije komplementa (CBC)

Ova se reakcija koristi za otkrivanje protutijela na zarazno sredstvo u pacijentovom krvnom serumu, kao i za identificiranje patogena prema njegovoj antigenskoj strukturi.

Do sada smo opisali jednostavnoserološke reakcije. CSC se smatra složenom reakcijom, jer u njemu ne djeluju dva, već tri elementa: antitijelo, antigen i komplement. Njegova je bit u činjenici da se interakcija između protutijela i antigena događa samo u prisutnosti proteina koji daju kompliment, a koji se adsorbiraju na površini formiranog kompleksa AG-AT.

Sami antigeni, nakon dodavanja komplementa,pretrpjeti značajne promjene koje pokazuju kvalitetu provedene reakcije. To može biti liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidno ili bakteriostatsko djelovanje.

Sama reakcija odvija se u dvije faze:

1. Stvaranje kompleksa antigen-antitijelo, koji istraživaču nije vizualno vidljiv.
2. Promjena antigena pod utjecajem komplementa.Ova se faza najčešće može pratiti golim okom. Ako reakcija nije vidljiva vizualno, tada se koristi dodatni sustav indikatora za prepoznavanje promjena.

Sustav indikatora

Ova se reakcija temelji na vezanju komplementa.Pročišćeni eritrociti ovna i hemolitički serum, koji ne sadrži komplement, dodaju se u epruvetu sat vremena nakon postavljanja RSC-a. Ako nevezani komplement ostane u epruveti, pridružit će se kompleksu AG-AT stvorenom između krvnih stanica janjetine i hemolizina i uzrokovat će njihovo otapanje. To će značiti da je RSK negativan. Ako eritrociti ostanu netaknuti, tada je, sukladno tome, reakcija pozitivna.

Reakcija hemaglutinacije (HA)

Dvije su u osnovi različite reakcije hemaglutinacije. Jedan od njih je serološki, koristi se za određivanje krvnih grupa. U ovom slučaju, crvene krvne stanice komuniciraju s antitijelima.

A druga reakcija nije serološka,kao što crvene krvne stanice reagiraju s hemaglutininima koje proizvode virusi. Budući da svaki patogen djeluje samo na određene eritrocite (piletina, janjetina, majmun), ova se reakcija može smatrati visoko specifičnom.

Razumijete, pozitivno ili negativno,moguće je smještajem krvnih stanica na dnu cijevi Ako njihov obrazac podsjeća na obrnuti kišobran, tada je željeni virus prisutan u krvi pacijenta. A ako su se svi eritrociti stvorili poput stupa novčića, tada se ne traže patogeni.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA)

Ovo je visoko specifična reakcija koja vam omogućuje utvrđivanje vrste, vrste virusa ili prisutnosti specifičnih antitijela u serumu pacijenta u krvi.

Njegova suština leži u činjenici da antitijela,dodan u epruvetu s ispitnim materijalom, sprečavajući taloženje antigena na eritrocitima, zaustavljajući time hemaglutinaciju. Ovo je kvalitativni znak prisutnosti specifičnih antigena u krvi za određeni ciljni virus.

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Reakcija se temelji na sposobnosti identifikacijeAG-AT kompleksi pod fluorescentnom mikroskopijom nakon tretmana fluorokromnim bojama. Ova metoda je jednostavna za upotrebu, ne zahtijeva izolaciju čiste kulture i traje malo vremena. Neophodan je za brzu dijagnostiku zaraznih bolesti.

U praksi se te serološke reakcije dijele na dvije vrste: izravne i neizravne.

Izravni RIF proizvodi se s antigenom kojiprethodno tretiran fluorescentnim serumom. I neizravno, lijek se prvo liječi konvencionalnim dijagnostičkim kompletom koji sadrži antigene za željena antitijela, a zatim se ponovno primjenjuje luminiscentni serum, specifičan za proteine ​​kompleksa AG-AT, i mikrobne stanice postaju vidljive pod mikroskopijom.